微(wēi)生物學檢(jiǎn)查(chá)方法包(bāo)括(kuò)微生(shēng)物限度檢查(chá)法(fǎ)和(hé)無菌(jūn)檢(jiǎn)查(chá)法(fǎ)。微(wēi)生物限度檢(jiǎn)查法是檢(jiǎn)查非(fēi)規定滅菌(jūn)製劑(jì)及原輔料(liào)受微牛(niú)物汙(wū)染(rǎn)程(chéng)度，包括(kuò)細(xì)菌，黴菌等(děng)菌種的數目(mù)及(jí)控(kòng)製菌檢(jiǎn)查。如(rú)外(wài)用製劑(jì)須檢查(chá)和驗證(zhèng)銅綠(lǜ)假單(dān)胞菌(jūn)，若製(zhì)劑(jì)含藥材原粉(fěn)等(děng)，述(shù)需(xū)檢查和驗(yàn)證(zhèng)大(dà)腸菌(jūn)群和(或)沙(shā)門菌(jūn)。通過不同(tóng)給藥途徑(jìng)，因(yīn)此臨床給藥途徑在(zài)微(wēi)生物限度(dù)檢查(chá)和(hé)方(fāng)法驗(yàn)證中(zhōng)有著(zhuó)*的(dí)地位。

微生(shēng)物檢查方法(fǎ)驗(yàn)證方法(fǎ)及測試菌種(zhǒng)有哪(nǎ)些(xiē)

一(yī)，細(xì)菌黴菌及酵母(mǔ)菌計數(shù)方法的驗證(zhèng)

1，驗證(zhèng)菌種

(1)大腸埃(āi)希菌(大腸杆菌)[CMCC(B)44102];

(2)枯草(cǎo)芽孢杆菌(枯(kū)草(cǎo)芽(yá)孢杆菌)[CMCC(B)63501];

(3)白色念(niàn)珠(zhū)菌(白(bái)色念珠菌(jūn))[CMCC(F)98001];

(4)黑曲(qū)黴(méi)(黑(hēi)曲(qū)黴(méi))[CMCC(F)98003];

該4種菌株具有(yǒu)普(pǔ)遍(biàn)的代表(biǎo)性，5種(zhǒng)菌分別代表不同的(dí)微(wēi)生物(wù)類(lèi)別(bié)，(1)(2)(3)屬細(xì)菌，(4)真菌，(5)黴菌。驗證所用的標準菌(jūn)種的(dí)傳(chuán)代數(shù)不得(dé)過(guò)5代(dài)。

2，驗(yàn)證(zhèng)方(fāng)法(fǎ)

1平皿(mǐn)法(fǎ)

對無(wú)明(míng)顯抑菌(jūn)作用的(dí)水溶性製(zhì)劑(jì)，采用(yòng)該(gāi)方(fāng)法(fǎ)進(jìn)行微(wēi)生(shēng)物(wù)限度檢查法的驗證。方法驗證(zhèng)的主(zhǔ)要(yào)思路(lù)：加菌回收。

2培養基稀(xī)釋(shì)法(fǎ)

略(lüè)帶抑菌(jūn)作用的水溶性(xìng)製劑(jì)(上(shàng)述常規(guī)平皿法試(shì)驗菌回(huí)收(shōu)率(shuài)低(dī)於(yú)70%的)，可采用該方(fāng)法進行(háng)方(fāng)法(fǎ)驗證(zhèng)。

3薄膜過濾法

一般(bān)適用於對可溶(róng)性抑菌製劑。主(zhǔ)要思路(lù)：濾除(chú)抑菌成(chéng)分(fēn)，加菌回收(shōu)。

4離心(xīn)沉定集菌法

主(zhǔ)要思路：離(lí)心(xīn)沉定(dìng)，離(lí)心集(jí)菌。

5中(zhōng)和(hé)法

主要思(sī)路：製備供(gōng)試液(yè)過程中加入適(shì)宜的鈍(dùn)化(huà)劑，酶(méi)等(děng)中和(hé)劑，以(yǐ)消除或(huò)減小製劑中的抑菌(jūn)性。

二(èr)，控製(zhì)菌的驗(yàn)證(zhèng)

1，驗證菌(jūn)種(zhǒng)

(1)大腸埃(āi)希(xī)菌(jūn)(大(dà)腸(cháng)杆菌(jūn))[CMCC(B)44102];

(2)乙(yǐ)型副傷寒沙門(mén)菌CMCC(B)50094];

(3)銅綠假(jiǎ)單胞菌(jūn)(銅綠假單胞(bāo)菌)[CMCC(B)10104];

(4)生(shēng)孢(bāo)梭菌(生孢梭菌)[CMCC(B)64941];

驗證時，依(yī)照(zhào)各品種(zhǒng)項(xiàng)下微生物限度(dù)標準中(zhōng)規定檢查的控(kòng)製菌(jūn)選(xuǎn)擇(zé)相應(yīng)驗(yàn)證的菌株(zhū)。驗(yàn)證(zhèng)大(dà)腸菌(jūn)群(qún)檢查(chá)法(fǎ)時(shí)，應采用(yòng)大腸埃希(xī)菌作為(wéi)驗證菌。

2，驗(yàn)證方法(fǎ)

(1)試驗組(zǔ)：取規定量供試液(各控(kòng)製(zhì)菌檢查方法下均(jūn)有規(guī)定)及(jí)10~100cfu試(shì)驗(yàn)菌(jūn)加入增(zēng)菌培(péi)養基中，依相(xiāng)應的(dí)控製菌(jūn)檢(jiǎn)查法進(jìn)行檢查(chá)。當采用薄膜過濾法時(shí)，試(shì)驗菌(jūn)液應(yīng)加(jiā)在(zài)最後(hòu)一次衝(chōng)洗(xǐ)液(yè)中，衝洗(xǐ)後，取出(chū)濾膜接種到(dào)增菌(jūn)培養(yǎng)基中。

(2)陰性菌對(duì)照組(zǔ)：設立陰性菌對照組是(shì)為了(liǎo)驗(yàn)證該控製菌的檢(jiǎn)查(chá)方法的(dí)專屬(shǔ)性。方法同試驗組，驗證(zhèng)大(dà)腸埃希菌，大(dà)腸菌(jūn)群，沙(shā)門(mén)菌檢(jiǎn)查法(fǎ)時的陰性對照用(yòng)，驗證(zhèng)銅綠假單(dān)胞菌檢(jiǎn)查(chá)法時(shí)得(dé)陰(yīn)性對照菌采(cǎi)用大腸埃(āi)希菌。

結(jié)果(guǒ)判(pàn)斷：陰(yīn)性菌(jūn)對(duì)照組不得(dé)檢出(chū)。若試(shì)驗組(zǔ)檢(jiǎn)出試驗(yàn)菌，證明可按(àn)此供試液(yè)製備方法和控(kòng)製(zhì)菌檢(jiǎn)查法(fǎ)進行(háng)控(kòng)製(zhì)菌(jūn)檢查。若(ruò)試驗(yàn)組未檢(jiǎn)出(chū)試驗菌，應(yīng)消(xiāo)除供試品種的(dí)抑(yì)菌活性，方法同細(xì)菌(jūn)，黴(méi)菌和(hé)酵母(mǔ)菌(jūn)檢查方法驗證(稀(xī)釋法，薄膜過(guò)濾法，中(zhōng)和(hé)劑，沉定法)，建(jiàn)立(lì)新的方法(fǎ)，重新(xīn)驗證。

微(wēi)生物(wù)檢查方法(fǎ)驗(yàn)證方法及測(cè)試(shì)菌種有哪些