病毒保(bǎo)存液(yè)適用(yòng)於(yú)病(bìng)毒(dú)，流感(gǎn)病毒(dú)，手足(zú)口病毒等(děng)常見病毒樣本(běn)采(cǎi)集(jí)保存運輸工作(zuò)，是采樣(yàng)管(guǎn)內浸(jìn)末(mò)采(cǎi)樣拭子(zǐ)病(bìng)毒(dú)樣本一種保護病毒(dú)的(dí)被(bèi)檢(jiǎn)測(cè)物(wù)質(zhì)的液體(tǐ)，可(kě)采集(jí)咽拭子(zǐ)，鼻(bí)拭子或特定部位(wèi)組織(zhī)樣(yàng)本(běn)，儲(chǔ)存(cún)的樣(yàng)本(běn)可(kě)用(yòng)於(yú)後續的核(hé)酸提取(qǔ)或(huò)純(chún)化(huà)等臨(lín)床(chuáng)實驗，病(bìng)毒(dú)保存(cún)液(yè)分(fēn)類 病毒滅活(huó)測試(shì)方(fāng)法。
病(bìng)毒保(bǎo)存(cún)液(yè)分類(lèi) 病(bìng)毒(dú)滅(miè)活測試方法(fǎ)
病毒(dú)保(bǎo)存液(yè)分(fēn)為(wéi)兩(liǎng)種(zhǒng)：滅(miè)活型和(hé)非(fēi)滅活型。
滅(miè)活型(xíng)的(dí)病毒(dú)保存液主(zhǔ)要是核酸提取裂解液改(gǎi)良的病(bìng)毒(dú)裂解型(xíng)保(bǎo)存液，裏麵(miàn)添(tiān)加有(yǒu)高(gāo)濃度(dù)的(dí)裂解鹽(yán)，能(néng)夠(gòu)迅(xùn)速高(gāo)效(xiào)地使(shǐ)待測樣本裏的(dí)病毒蛋(dàn)白裂解(jiě)失活，可以有效(xiào)防(fáng)止感染(rǎn)，同時(shí)又含(hán)有Rnase酶抑(yì)製劑(jì)，能保(bǎo)護病毒(dú)核(hé)酸(suān)不(bù)被降(jiàng)解(jiě)，後(hòu)續(xù)的(dí)NT-PCR實驗隻(zhī)要能(néng)檢(jiǎn)測(cè)出(chū)病(bìng)毒(dú)的(dí)核(hé)酸(suān)既可以做(zuò)出診(zhěn)斷(duàn)。而且(qiě)能在(zài)常溫(wēn)下保存(cún)相對較(jiào)長(cháng)的時(shí)間。
非滅活型(xíng)保存(cún)液主要是(shì)以運送(sòng)培(péi)養基為(wéi)基礎改良的病毒維(wéi)持液型(xíng)保存液。它(tā)可(kě)以同時保留病毒(dú)的蛋白質外(wài)殼(ké)和(hé)病毒(dú)核酸DNA或(huò)者是(shì)RNA，這(zhè)樣(yàng)病毒在(zài)體外具有(yǒu)蛋(dàn)白抗原(yuán)表(biǎo)位和核酸(suān)的完(wán)整性，當然(rán)操作失(shī)誤(wù)時(shí)也有一(yī)定的(dí)感(gǎn)染性風險。采樣後(hòu)長時(shí)間(jiān)保存(cún)需(xū)要保(bǎo)持嚴格低溫(wēn)。
不(bù)管是何種病(bìng)毒保(bǎo)存(cún)液，我(wǒ)們(mén)在采(cǎi)樣過後都要(yào)盡快檢(jiǎn)測或者嚴格低溫保存，保證(zhèng)檢測(cè)做到準確無(wú)誤。病毒(dú)的繁(fán)殖與變異速度較快(kuài)，要維持(chí)病(bìng)毒(dú)樣本的(dí)穩(wěn)定(dìng)性(xìng)，病(bìng)毒保(bǎo)存液起到至(zhì)關重(zhòng)要的作(zuò)用。
病毒(dú)保存液病(bìng)毒滅活(huó)測(cè)試(shì)方法(fǎ)
1，病毒保存液檢測對(duì)象
毒株：甲(jiǎ)型(xíng)流(liú)感病(bìng)毒(dú)HINI (VR- 1469)
細(xì)胞：MDCK細胞(bāo)
2，病毒保存液(yè)檢(jiǎn)測步(bù)驟：
1）取樣(yàng)品病毒(dú)保(bǎo)存(cún)液（非(fēi)滅活型） 9.8mL，加入0.2mL病毒原液(yè)混匀，分裝若(ruò)幹測(cè)試液(yè)，存(cún)至(zhì)要求溫(wēn)度；
2）保存(cún)至對(duì)應天數(shù)後(hòu)取出(chū)測(cè)試液(yè)，檢(jiǎn)測(cè)病毒滴(dī)度；
a）10倍(bèi)倍比稀釋測(cè)試液(yè)；
b）將(jiāng)稀釋液(yè)加(jiā)入(rù)含生長(cháng)至單(dān)層的MDCK細胞(bāo)的(dí)96孔(kǒng)細胞(bāo)培養(yǎng)板(bǎn)上(shàng)，並設置(zhì)正常(cháng)對(duì)照組，加等量培養(yǎng)液(yè)；
c）置於35'C，5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育(yù)60 min後棄去(qù)上清(qīng)液，加入雙(shuāng)抗400 IU/mL的(dí)維(wéi)持培(péi)養液繼續(xù)孵(fū)育(yù)3~5天(tiān)，每(měi)天觀(guān)察(chá)細胞增長狀況；
d）當(dāng)接(jiē)種病(bìng)毒的(dí)MDCK細胞出(chū)現變(biàn)圓或縮小等(děng)病變現象(xiàng)時，記錄產生(shēng)細(xì)胞病變的情況；
e）根(gēn)據Reed-Muench公式(shì)計算(suàn)半數感(gǎn)染(rǎn)量(liáng)TCID50。
中科檢(jiǎn)測作(zuò)為專(zhuān)業的(dí)第(dì)三方(fāng)檢(jiǎn)測(cè)機構(gòu)，開展病毒采(cǎi)集(jí)管檢測(cè)，病(bìng)毒(dú)保存(cún)液(yè)病(bìng)毒(dú)滅(miè)活(huó)測試，報告內容主要(yào)包含試(shì)驗毒株，實(shí)驗批次(cì)，保(bǎo)存溫度(dù)，保(bǎo)存天數，病毒(dú)滴度，病(bìng)毒活性及病毒(dú)滅活率等檢(jiǎn)測(cè)數(shù)據(jù)，具體費(fèi)用及周期可以(yǐ)咨詢中科(kē)檢測工程師(shī)了(liǎo)解。
