病毒保存(cún)液適(shì)用於病(bìng)毒(dú)，流感(gǎn)病毒(dú)，手足口病毒等常(cháng)見(jiàn)病(bìng)毒樣(yàng)本采集(jí)保存運輸(shū)工(gōng)作，是采樣(yàng)管(guǎn)內浸末采(cǎi)樣(yàng)拭(shì)子病(bìng)毒樣(yàng)本(běn)一種保護(hù)病(bìng)毒(dú)的被檢(jiǎn)測物質的液(yè)體，可(kě)采集咽拭子(zǐ)，鼻拭子(zǐ)或(huò)特定(dìng)部位組(zǔ)織樣本，儲(chǔ)存(cún)的樣本可用(yòng)於(yú)後續的(dí)核酸(suān)提取(qǔ)或純(chún)化等臨(lín)床(chuáng)實(shí)驗。

病毒保存液(yè)通常分為(wéi)兩種，一種是(shì)非滅活(huó)型，能(néng)夠保護病毒(dú)的蛋(dàn)白(bái)和核酸，另一種是(shì)滅(miè)活型，通常(cháng)含(hán)有滅(miè)活病毒(dú)的裂(liè)解(jiě)鹽(yán)，裂解(jiě)蛋(dàn)白(bái)而保(bǎo)護核酸。

滅活型病毒保(bǎo)存(cún)液(yè)：主(zhǔ)要(yào)是(shì)核(hé)酸(suān)提(tí)取裂解液改良的病(bìng)毒(dú)裂解型(xíng)保(bǎo)存(cún)液，裏麵(miàn)添加(jiā)有(yǒu)高濃度(dù)的裂解(jiě)鹽，能夠(gòu)迅速(sù)高效地使待測樣本利的(dí)病(bìng)毒蛋白(bái)裂解(jiě)失活(huó)，可(kě)以(yǐ)有(yǒu)效防止感(gǎn)染，同時(shí)又(yòu)含有Rnase酶(méi)抑製劑，能(néng)保護(hù)病毒(dú)核(hé)酸不被降(jiàng)解，後續(xù)的(dí)NT-PCR實驗隻要能檢(jiǎn)測(cè)出病(bìng)毒(dú)的核(hé)酸即可以(yǐ)做(zuò)出(chū)診斷(duàn)。而(ér)且能在常溫(wēn)下(xià)保存相對較(jiào)長(cháng)的時(shí)間。

非滅活型保存液(yè)：主(zhǔ)要是以運(yùn)送(sòng)培(péi)養(yǎng)基為(wéi)基礎(chǔ)改良的(dí)病毒維(wéi)持液型保存液。這(zhè)一(yī)種是同時(shí)保(bǎo)留(liú)了病毒(dú)的蛋白質(zhì)外殼以(yǐ)及(jí)病(bìng)毒核(hé)酸DNA或者RNA，這樣病毒在體外(wài)具(jù)有蛋(dàn)白抗原表位(wèi)和核(hé)酸(suān)的完(wán)整(zhěng)性，當然(rán)操(cāo)作失(shī)誤時(shí)也有一定的(dí)感染性風(fēng)險。采(cǎi)樣後長時(shí)間保(bǎo)存需(xū)要保持(chí)嚴格(gé)低(dī)溫。

中科(kē)檢測(cè)可(kě)開展(zhǎn)針(zhēn)對流感(gǎn)病(bìng)毒，腸道病毒，冠狀病毒(dú)，皰(pào)疹(zhěn)病毒(dú)等(děng)病(bìng)毒保(bǎo)存液(yè)病毒滅(miè)活(huó)效(xiào)果檢測，病毒保存(cún)液檢測可針對(duì)不同(tóng)保(bǎo)存溫(wēn)度，不同(tóng)保(bǎo)存(cún)時間等不(bù)同條件(jiàn)下的病毒(dú)活性及病毒滅(miè)活率(shuài)。

病(bìng)毒(dú)保(bǎo)存液(yè)檢測方法(fǎ)

1. 試(shì)驗對(duì)象：

毒株:甲型流(liú)感病(bìng)毒(dú)HINI (VR- 1469)

細胞(bāo): MDCK細胞.

2.試驗(yàn)步(bù)驟：

1）取樣(yàng)品病毒保存液（非滅(miè)活型） 9.8mL，加(jiā)入(rù)0.2mL病毒(dú)原(yuán)液混匀(yún)，分裝若(ruò)幹測試(shì)液，存至要(yào)求(qiú)溫(wēn)度(dù);

2）保(bǎo)存(cún)至對應天數後(hòu)取(qǔ)出(chū)測試液(yè)，檢(jiǎn)測病毒(dú)滴度
；

a）10倍倍比稀釋測試液(yè)
；

b）將(jiāng)稀(xī)釋液(yè)加(jiā)入(rù)含生長(cháng)至單(dān)層(céng)的(dí)MDCK細胞(bāo)的(dí)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上(shàng)，並設置正常(cháng)對照組，加等(děng)量(liáng)培(péi)養液(yè)
；

c）置於35'C，5%CO2的(dí)培養箱中孵育60 min後棄(qì)去上(shàng)清(qīng)液(yè)，加(jiā)入(rù)雙(shuāng)抗(kàng)400 IU/mL的維持培(péi)養液(yè)繼(jì)續孵育3~5天，每(měi)天觀察細胞(bāo)增(zēng)長(cháng)狀況(kuàng)
；

d）當接種病(bìng)毒(dú)的(dí)MDCK細胞出(chū)現(xiàn)變圓(yuán)或(huò)縮(suō)小等病變現(xiàn)象時，記錄(lù)產(chǎn)生細胞病變的情(qíng)況(kuàng);

e）根據Reed-Muench公式(shì)計(jì)算(suàn)半(bàn)數感(gǎn)染量TCID50。

病毒保(bǎo)存(cún)液(yè)病毒滅(miè)活(huó)效果(guǒ)檢測(cè)